準備BEGMkit培養(yǎng)基（Lonza/Clonetics，CC-3170）備注：培養(yǎng)基包含（A+B），ATCC不使用BEGM試劑盒提供的GA（慶大霉素-兩性霉素B混合物）和腎上腺素（Epinephrine），另向其中添加額外的5ng/mLEGF、70ng/mL磷酸乙醇胺和10%FBS。可根據(jù)實驗要求添加P/S雙抗，1%。

A：BEBM基礎培養(yǎng)基（貨號CC-3171）500ML

B:細胞生長添加劑（貨號CC-4175）一套（包含下列試劑）

●BPE,2.0ml●Hydrocortisone,0.5ml●hEGF,0.5ml

●Epinephrine,0.5ml●Insulin,0.5ml●Transferrin,0.5ml

●Triiodothyronine,0.5ml●RetinoicAcid,0.5ml●GA,0.5ml

注意：Theflasksusedshouldbeprecoatedwithamixtureof0.01mg/mLfibronectin,0.03mg/mLbovinecollagentypeIand0.01mg/mLbovineserumalbumindissolvedinBEBMmedium.1）收貨前根據(jù)說明書培養(yǎng)條件，提前準備細胞培養(yǎng)所需材料。
2）收到細胞后，請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
3）收貨后沒有外觀損壞的情況下用75%酒精消毒后將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h等待細胞穩(wěn)定。
4）細胞穩(wěn)定后在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，判斷細胞的密度并清晰拍照200倍400倍照片最少2張記錄反饋細胞狀態(tài)以防出現(xiàn)售后作為證據(jù)，沒有照片和反饋默認接受細胞質量沒有問題。

備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。當密度達到80%左右，?傳代比例前幾次都按照1:2傳代，傳代后一個倍增周期后可以長成2瓶80%左右密度的細胞時，凍存其中一瓶成1個1ml的凍存管當種子細胞保存，另外一份長滿的細胞繼續(xù)1:2傳代，反復操作后凍存細胞種子大約3個以上。后續(xù)根據(jù)細胞倍增效率和密度可以適當擴大傳代比例做實驗。

傳代比例：
1個T25瓶傳2個6cm的培養(yǎng)皿或者2個T25瓶相當于1:2
1個T25瓶傳1個10cm的培養(yǎng)皿或者1個T75瓶相當于1:3